Forskjellen mellom PCR og sanntids-PCR

PCR vs sanntids-PCR

PCR eller Polymerase kjedereaksjon er en revolusjonert funn i moderne molekylærbiologi, som ble utviklet av kjemikeren Kary Mullis i 1983. Den tillater en enkelt sekvens i et komplekst DNA å bli forsterket for analyse. Den grunnleggende ideen til PCR er at to primere, som er komplementære til de motsatte strengene i en DNA-sekvens, er orientert mot hverandre; primrene produserer komplementære tråder, som hver inneholder den andre primeren. Resultatet er derfor en stor mengde av en sekvens som tilsvarer DNA som ligger mellom de to primene. DNA-polymeraseenzym brukes til å forlenge primrene i PCR. DNA-polymerase er et termostabilt enzym, og det har evnen til å overleve ved høye temperaturer (94 til 95 ° C) anvendt for denaturering av template DNA.

PCR innebærer tre trinn, nemlig gjentatte runder av denaturering, annealing av primere og syntese av DNA. En termocykler maskin brukes til å utføre denne reaksjonen slik at den kan programmeres for å endre temperaturene raskt og nøyaktig. Programmer av PCR er kriminelle undersøkelser, DNA fingeravtrykk, deteksjon av patogener og analyse av DNA fra tidlige humane arter.

Hva er konvensjonell PCR?

Det er tre store stadier av konvensjonell PCR, nemlig; DNA-amplifikasjonsfase, separering av PCR og deteksjon av produkter. Separasjon av DNA-segmenter utføres vanligvis ved agarosegelelektroforese. Produktene blir deretter farget med etheiduimbromid. Endelig oppnås deteksjon ved visualisering av bånd på geler under UV-lys. Derfor blir ikke de endelige resultatene av konvensjonell PCR uttrykt som tall. Normalt er konvensjonell PCR bare i stand til å oppdage en enkelt parameter.

Hva er sanntids-PCR?

Real-time PCR kan oppdage forsterkning av produkter, ettersom produktene er syntetisert. Med utviklingen av teknologi har PCR blitt en meget populær teknikk, spesielt for deteksjon og identifisering av bakterier i matvarer. Real-time PCR bruker et fluorescerende fargesystem og termocykler utstyrt med fluorescens-deteksjonsevne.

Hva er forskjellen mellom konvensjonell PCR og sanntids PCR?

• Konvensjonell PCR er mer tidkrevende da den bruker gelelektroforese for å analysere de forsterkede PCR-produktene. I kontrast er realtids-PCR mindre tidskrevende da det kan oppdage forsterkninger i de tidlige faser av reaksjonen.

• Real-time PCR samler data i den eksponentielle vekstfasen av PCR mens tradisjonell PCR samler data ved sluttpunktet av reaksjonen.

• Endepunktresultatene fra den konvensjonelle PCR kan ikke være veldig presise, men resultatene av sanntids-PCR er veldig presise.

• Real-time PCR er mer følsom enn konvensjonell PCR.

• Konvensjonell PCR har svært dårlig oppløsning, mens realtids-PCR kan oppdage svært små endringer på grunn av høy oppløsning.

• Endestedsdeteksjon av konvensjonell PCR har kort dynamisk rekkevidde, mens sanntids PCR-deteksjon har bredt dynamisk område.

• I motsetning til konvensjonell PCR finnes automatiserte detekteringsteknikker i sanntids-PCR.

• Konvensjonell PCR er svært sofistikert og arbeidsintensiv mer enn sanntids-PCR.

• I motsetning til sanntids-PCR kan konvensjonell PCR ikke diskriminere mellom døde og levende bakterier.

• Real-time PCR bruker fluorescerende fargesystem for å oppdage produktene mens konvensjonell PCR bruker etidiumbromid og UV-lys for å visualisere bånd i agarosegelmediet.